SARS-CoV-2三重荧光检测试剂盒

产品货号：

MT015818

中文名称：

SARS-CoV-2三重荧光检测试剂盒

英文名称：

SARS-CoV-2 LAMP-TaqMan Kit

产品规格：

25T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒采用多重LAMP扩增技术，配合特异性的双荧光探针进行新冠病毒检测。该试剂盒采用单管三重设计，靶标基因为ORF1ab、N基因和人内参β-actin基因。

本试剂盒在直接使用拭子浸泡液的情况下，无需核酸提取，30分钟内完成检测。该试剂盒有效灵敏度为200个病毒/拭子，极限灵敏度为50个病毒/拭子；在体外转录的RNA测试中，无论ORF1ab或N基因，灵敏度均为单copy。

产品特点

单管三重设计，使得检测数据更可靠，避免漏检，避免假阴性。
极限灵敏度为50个病毒/拭子；体外转录RNA为模板进行检测，灵敏度为单copy水平。
采用特异性的双标TaqMan探针，准确性100%，无假阳性。
全程闭管检测，30min内完成检测；在每个检测管中含有100个病毒以上的样本，10min内即可完成检测。
核酸免提取，配备病毒裂解液，漩涡10s即可完成裂解。
匹配便携恒温荧光检测设备，可在野外、社区、家庭、工作场所，任何环境下操作。
操作简便、易学、易懂，无需复杂的培训工作。

在单管中进行三重LAMP扩增，分别靶向ORF1ab（FAM）和N基因（FAM），防止突变造成的检测脱靶。内参beta-actin（VIC）用于扩增和采样质控(内参引物不能扩增人基因组DNA)。
在直接使用拭子浸泡液的情况下（不进行核酸提取），有效灵敏度：200个病毒/拭子；极限灵敏度：50个病毒/拭子。在体外转录的RNA测试中，无论ORF1ab或N基因，灵敏度均为单copy。人Total RNA可检测到0.1ng。\
无需核酸纯化步骤，可以直接使用病毒灭活后的拭子浸泡液。在25μL的LAMP反应体系中，可采用10μL的拭子浸泡液，上样量大，增加检出率，降低假阴性率。
反应速度快，恒温65℃条件下，30min内完成检测。在每个检测管中含有100个病毒以上的样本，10min内完成检测。
采用特异性的双标TaqMan探针，准确性100%，无假阳性。
核心试剂成分为冻干品形态，方便运输与保存。
试剂盒的靶标区域
N基因靶标序列如下：
CAACATTGCCAAAAGGCTTCTACGCAGAAGGGAGCAGAGGCGGCAGTCAAGCCTCT
TCTCGTTCCTCATCACGTAGTCGCAACAGTTCAAGAAATTCAACTCCAGGCAGCAGTA
GGGGAACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCAATGGCGGTGATGCTGCTCTTGCTTTGC
TGCTGCTTGACAGATTGAACCAGCTTGAGAGCAAAATGTCTGGTAAAGGCCAACAAC
AACAAGGCCAAACTGTCACTAAGAAATCTGCTGCTGAGGCTTCTAAGAAGCCTCGGC
ORF1ab基因靶标序列如下：
ATGTGTCGCCCTTTCATCAAACGTTCGGATGCTCGAACTGCACCTCATGGTCATGTTA
TGGTTGAGCTGGTAGCAGAACTCGAAGGCATTCAGTACGGTCGTAGTGGTGAGACAC
TTGGTGTCCTTGTCCCTCATGTGGGCGAAATACCAGTGGCTTACCGCAAGGTTCTTC
TTCGTAAGAACGGTAATAAAGGAGCTGGTGGCCATAGTTACGGCGCCGATCTAAAGTC
ATTTGACTTAGGCGACGAGCTTGGCACTGATCCTTATGAAGATTTTCAAGAAAACTGG

检测样本类型
咽拭子、鼻腔拭子和肛拭子，无需核酸提取，浸泡于病毒裂解液中（本试剂盒配备）

检测流程示意图

典型检测结果
应用本试剂盒进行新冠病毒核酸检测，目的基因为FAM通道（红色），内参基因beta-actin为ROX通道（蓝色），典型扩增曲线如下图：

组分	规格
SARS-CoV-2 Triplex LAMP Assay	1瓶
2.5×LAMP Buffer	0.25mL
ddH2O	1mL
N-O阳性标准品	20μL
快速病毒裂解液	10mL

试剂盒整体保存于-20℃，3年内有效。4～8℃条件下可保存6个月，常温25℃条件下可保存2个月。
CoV-2 Triplex LAMP Assay为干粉形式（每瓶用于25人份检测），包含Bst 5.1 DNA聚合酶、引物、探针等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。使用前每瓶用0.125mL的ddH2O溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存15天，在-60℃以下长期保存。
N-O阳性标准品为DNA形式，浓度为100 copy/μl。每次阳性对照使用10μL。
不同批次的试剂组分，不要混用。

检测样本的使用说明：

咽拭子、鼻腔拭子采集完毕后，将拭子棉签部分放入到含有0.3mL本试剂盒提供的快速病毒裂解液中，可在1.5mL EP管或2mL病毒保存管中操作。
在裂解液覆盖棉签的情况下，漩涡混合10-20s，使棉签上的病毒和人体细胞从棉签上脱落。
上述裂解产物可以直接作为模板进行检测，或在56℃条件下进行病毒灭活后进行检测。未使用完毕的病毒液可-80℃长期保存病毒核酸，也可以用于病毒的核酸纯化。

仪器和程序设置
LAMP的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备），荧光通道选择FAM和VIC双通道。
步骤1：65℃ 10s
步骤2：65℃ 50s收集信号，循环30次，即总反应时间为30min。
注意：本试剂盒无需热盖加热，在使用定量PCR进行检测时，可关掉PCR仪的热盖功能，以缩短检测时间。
配置反应体系
- 向每瓶CoV-2 Triplex LAMP Assay冻干品中，加入0.125mL的ddH2O溶解。
- 向检测反应管中加入5μL溶解后的LAMP Assay、10μL的2.5xLAMP Buffer。
- 向检测反应管中加入10μL灭活后的待检测病毒液[或N-O基因阳性标准品(阳性对照)，或快速病毒裂解液(阴性对照)]。
- 反应体系配好后，混匀2-5s。并短暂离心，置于荧光定量PCR仪上进行反应即可。

结果判读

结果判读的成立条件

	FAM通道（SARS-CoV-2）	VIC通道（beta-actin内参）	结果
N-O基因阳性标准品	起峰，成典型扩增曲线	不参考	可靠
阴性对照	无信号	无信号	可靠
N-O基因阳性标准品	无信号	不参考	试剂失效，重新检测
阴性对照	起峰，成典型扩增曲线	不参考	发生污染，重新检测

检测样本结果判读

FAM通道（SARS-CoV-2）	VIC通道（beta-actin内参）	判读结果
起峰，成典型扩增曲线	不参考	阳性
无信号	起峰	阴性
无信号	无信号	采样不佳或样本保存不当，重新采样并进行检测。

典型的检测结果

阳性样本(10 copies假病毒)
红色线为FAM信号，表明存在SARS CoV-2核酸分子

阴性样本（10μL咽拭子浸泡液）
FAM无信号，VIC有信号，表明不含有CoV核酸分子

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